Перейти в содержание Вестника РНЦРР МЗ РФ N11.

Текущий раздел: Онкология

 

Ксеновакцинация   в профилактике метастазов увеальной   меланомы.

Бровкина А.Ф.1;  Кешелава В.В.2;  Сологуб В.К.3; Коромыслова И.К.3;  Северин С.Е.3; Баранникова Т.В.2.

1Российская Медицинская Академия последипломного образования Росздрава

2 ФГУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздравсоцразвития РФ», г. Москва.

3Московский Научно-Исследовательский институт Медицинской Экологии

 

Адрес документа для сылкиhttp://vestnik.rncrr.ru/vestnik/v11/papers/brovk_v11.htm

 

Статья опубликована 7 февраля 2011 года.

Идентификационный номер статьи в ФГУП НТЦ “ИНФОРМРЕГИСТР”:

 

Контактная информация:

 

Рабочий адрес: Российская Медицинская Академия последипломного образования Росздрава   123995 г. Москва, ул. Баррикадная, д.2/1, тел. +7 (499) 252-21-04, факс +7 (495) 254-98-05

 

Рабочий адрес: 117997, г. Москва, ул. Профсоюзная, д. 86, ФГУ «РНЦРР», +7 (495) 333-54-30

Рабочий адрес: 117638 госква, Симферопольский бульвар, д.8, Московский Научно- Исследовательский институт Медицинской Экологии, тел.:+7 (499)613-23-20, факс: +7 (499)613-48-18

 

Резюме

На основе результатов экспериментальных исследований и руководствуясь протоколом №1 от 22 января 2004 года МЗ РФ, авторами представлены результаты клинических исследований по применению биотерапии в онкологии. Представлен первый опыт применения ксеновакцинации  у 35 больных увеальной меланомой с целью предупреждения  возникновения  гематогенных метастазов проведена ксеновакцинация. Сроки наблюдения за больными с момента начала вакцинации от12 до 64 месяцев. Безрецидивный период отмечен у 27 больных при медиане  наблюдения 49.7 мес. Авторы полагают, что есть основание рассматривать ксеновакцинацию как доступный метод профилактики метастазов увеальной меланомы.

Ключевые слова:Увеальная меланома,  ксеновакцинация, биотерапия.

 

 

Xenovaccine in the preventiv of metastases of uveal melanoma

 

1A.F.Brovkina, 2V.V.Keshelava, 3V.K. Sologub, 3I.K. Koromyslova, 3S.Ye.Severin, 2T.V.Barannikova

 

1Russian Medical Academy for Post-Graduate Education of the Ministry of Health Care and Social Development

2Russian   Scientific  Centre   of  Roentgenology of the Ministry of Health Care and Social Development

3Moscow Research Institute of Medical Ecology

 

 

Summary

By the results of experimental studies and by being guided by Protocol № 22 dated 22, 2004, by the Ministry of Health of the Russian Federation, the authors have conducted clinical trials of biotherapy used in oncological care. They describe the first experience in using xenovaccination in 35 patients with uveal melanoma to prevent hematogenic metastases. The follow-ups of the patients lasted within 12-64 months after initiation of the vaccination. No recurrences were observed in 27 patients during follow-ups whose durations averaged 49,7 months. The authors consider that this is reason to regard xenovaccinaton as an available method for the prevention of metastases of uveal melanoma.

Key words: uveal melanoma, xenovaccination, biotherapy.

 

Оглавление:

Введение

Материал и методы

Результаты исследования и их обсуждение

Заключение

Список литературы

                                                                                         

Введение

Увеальная меланома  – первичная злокачественная опухоль   занимает первое место  по частоте встречаемости среди внутриглазных новообразований. Заболеваемость увеальной меланомой по ежегодной обращаемости   в различных регионах России колеблется  от 6,23 до 12 человек на 1 млн. взрослого населения.  В Москве, где функционирует городской офтальмоонкологический центр, этот показатель достигает 10-12 случаев на 1 млн. популяции [6,]. Смертность от гематогенного метастазирования  после удаления пораженного меланомой глаза  достигает  50-76 % в течение первых пяти лет после удаления пораженного меланомой глаза [1 16. На частоту метастазирования оказывает влияние целый комплекс факторов, среди которых большую роль играют размеры опухоли.  Однако и маленькие меланомы, например,  хориоидеи с элевацией до 1 мм склонны к метастазированию с частотой до 15% [1,16,].

С 70-х годов прошлого столетия в качестве органосохранного лечения меланом хориоидеи широко применяют брахитерапию.   Собственный многолетний опыт и данные, опубликованные  в открытой печати, свидетельствуют о снижении показателей метастазирования после брахитерапии от 12%  до 18%. А при 5- 10 летнем наблюдении этот показатель уменьшается почти до 8,8% [2,3,14,].

Принимая во внимание увеличение частоты встречаемости увеальной меланомы и отдаленные  результаты  после  хирургического и лучевого (брахитерапия) лечения, следует сделать вывод о сохранении актуальности вопроса о профилактике развития метастазов при данном заболевании .

 Для повышения  эффективности лечения и профилактики развития метастазов увеальной  меланомы применяют комбинированные подходы: сочетание хирургического метода, лучевого (брахитерапия с интракорпоральным облучением  радиофармацевтическим  препаратом  59Fe) с профилактической иммунотерапией [4,5]. Химиотерапевтическое лечение для этих целей при увеальной меланоме не эффективно.

По мнению большинства авторов, адьювантная иммунотерапия высокими дозами интерферонов приводит только к увеличению безрецидивной выживаемости, но в меньшей степени влияет на общую выживаемость больных [11,]. До настоящего времени не существует общепринятой методики адьювантной терапии кожной и увеальной меланом, имеющих высокий риск развития метастазов. 

В последние годы в отечественной и зарубежной литературе появляются сообщения по использованию биотерапии, как метода лечения меланомы  с помощью биологически активных веществ    (противоопухолевых вакцин, активированных лимфоцитов, моноклональных антител, цитокинов и др.). Применяемые для этой цели препараты действуют, в основном, как активные специфические стимуляторы противоопухолевого иммунитета [10,].

Клиническая онкология имеет богатый опыт  применения противоопухолевых вакцин, эффективность  которых подтверждена во многих клиниках мира. В настоящее время  вакцины преимущественно  применяются для попытки лечения уже имеющихся метастазов. Однако не меньший интерес вызывает возможность их использования  с профилактической целью до клинического проявления метастазов. Принципиально новым решением этой проблемы, по мнению многих авторов, может стать вакцинация, основанная на ксеногенной трансплантации, т.е. пересадка опухолевых клеток  животного человеку. 

 Профилактика заболевания путем искусственного воспроизведения сходного, но доброкачественного процесса - вакцинация, была впервые использована  Дженнером более 200 лет назад. Прививкой коровьей оспы (vaccinia - лат.),  по Дженнеру, в 1768 году  была начата борьба с вирусом оспы человека. Данный  метод  позволил  ликвидировать  оспу человека, как заболевание, во всем мире.

 Использование принципа прививки человеку живого патологического материала от животного со сходным заболеванием возможно и в онкологии. Вакцины из опухолевых  клеток  животных именуются в онкологии ксеногенными, в отличие от аллогенных, полученных из опухоли другого человека, и аутологичных, полученных из собственных клеток пациента.

В качестве  ксеногенных  вакцин для человека  могут быть использованы инактивированные клетки перевиваемых опухолей мышей - метод, нашедший широкое применение в экспериментальной онкологии. Основанием для этого служат следующие данные:

1) перевиваемые опухоли мышей специфичны по отношению к хозяину, они также как и вирус вакцины у коров, вызывают патологический процесс только у животных (мышей) и только определенной линии;

2) несмотря на абсолютную несовместимость опухоли мыши с организмом человека,. многие опухолеспецифические антигены человека и мыши сходны [9,12,15,].

Применительно к меланоме,  концепция Дженнера подразумевает наличие опухоли животного (мыши), иммуногенной и безвредной для человека . В качестве такой опухоли предложена сингенная для мышей линии C57Black/6 злокачественная меланома В-16. Данная экспериментальная модель  широко использовалась в исследованиях, связанных с противоопухолевым иммунитетом. Минимальная  доза клеток, вызывающая опухолевый рост для этой меланомы,  всего 100  - 1000 на подкожную инъекцию сингенной мыши, и в то же время В-16 не прививается мышам других линий даже при введении доз, больших  в 100 раз . У человека  клетки мышиных опухолей, в том числе и меланомы, уничтожаются  в месте введения за 15 минут, благодаря врожденному иммунитету к специфическим полисахаридным антигенам грызунов, присущему всем приматам [13,].

 Для трансплантации ксеногенной опухоли предложен метод предварительного создания соединительнотканной капсулы. Соединительнотканная капсула образуется после подкожного введения  биосовместимого (инертного) геля и предохраняет трансплантированные клетки от быстрой элиминации [17]. Гель играет роль среды,  пригодной для размножения опухолевых клеток, которые  отторгаются по мере развития новообразованных сосудов и попадания под капсулу иммунокомпетентных клеток, стимулированных присутствием чужеродных антигенов.

Исследован эффект вакцинации мышей клетками ксеногенной меланомы в гель, защищенной предварительно сформированной подкожной соединительнотканной  капсулой. Эксперименты выполнены на мышах при использовании сингенных клеток меланомы мыши линии В-16 в качестве клеток - мишеней и ксеногенных клеток меланомы человека линии SK-MEL-1 для вакцинации. Клетки SK-MEL-1 вводили в васкуляризованную соединительнотканную капсулу, которая формировалась вокруг введенного под кожу мышей полиакриламидного геля в течение 6-8 недель. Использование этого подхода обеспечивало эффективную защиту ксеногенных опухолевых клеток от быстрой элиминации иммунокомпетентными клетками мыши. Показано, что в этих условиях происходит формирование в организме животного- реципиента долговременного клеточного иммунитета в отношении сингенной мышиной меланомы линии В-16.   Авторами также  ранее было установлено, что  ксеновакцинация  (клетками перевивной линии меланомы человека SK.MEL-28 или первичными культурами клеток меланомы человека) приводит к биологически значимому (> 70 %) торможению роста сингенной меланомы В-16 у мышей. Эффект ксеновакцинации возрастает с уменьшением прививочной  дозы В-16 ( от 1,5 до 0,0625х106 опухолевых клеток). При использовании дозы 0,0625х106 клеток В-16 (на животное) ксеновакцинация предотвращает выход опухолей у 66,8 % животных. Ксеновакцинация индуцирует появление в вакцинированном  организме  цитотоксических (в отношении В-16) спленоцитов, цитотоксическая активность (ЦТА) которых сохраняется в течение всех  сроков наблюдения (до 12 недель). Полученные  данные свидетельствуют о том, что ксеновакцинация, проведенная в профилактическом  режиме у животных с меланомой  В-16 (прививочная  доза опухолевых клеток 0,125х 106), с последующим удалением опухолевого узла на 13 сутки снижает частоту метастазирования в легких до 40% и степень метастатического поражения легочной ткани [7,8].                                

В рамках  протокола №1 от 22 января 2004 года МЗ РФ нами проведены медико-биологические и клинические исследования  по применению биотерапии в онкологии.

Цель данной работы -  исследование эффективности клеточной линии В-16, как живой ксеногенной   вакцины, для профилактики развития  метастазов у больных  увеальной меланомой.

Для исследования была сформирована  группа  больных

увеальной меланомой, стадии Т2-4N0M0,  после радикального хирургического лечения (энуклеация) или  брахитерапии. Контрольная группа была сформирована на основе архивных  данных для сравнения  безрецидивной выживаемости.

Перейти в оглавление статьи >>>

 

Материал и методы

За период с 2004 по 2007 годы включительно  пролечено 35 больных   увеальной меланомой: мужчины-10, женщины- 25. Возраст больных – 34 - 70 лет. Всем больным до начала вакцинации было проведено полное клиническое  обследование, включающее рентгенографию органов грудной клетки, УЗИ органов брюшной полости, лимфатических узлов или КТ/МРТ органов грудной клетки и брюшной полости; биохимический , клинический анализы крови; анализ крови на иммунный статус: ЦТА  лимфоцитов, интерферон (ИФ), интелейкин-4 (ИЛ4). Состояние хориоидальной меланомы представлено на рис. 1,2.


Рис.1. Картина глазного дна больного с увеальной меланомой больших размеров. 

 


 

Рис.2. Глаз того же больного после энуклеации.

 

Критерии включения больных в исследование:

- гистологически или ангиографически верифицированный диагноз опухоли;

- статус по шкале ECOG 0-1;

- возраст старше 18 лет;

- клинические и биохимические показатели анализов крови;

- нормальный уровень опухолеассоциированного маркера S-100 А1В после проведенного  лечения;

Критерии исключения больных из исследования:

- поражение центральной нервной системы;

- активный аутоиммунный процесс;

- возраст старше 70 лет;

- больные с инфекцией: HIV, HBV, HCV;

- другие инфекционные заболевания, клинически значимые сердечнососудистые заболевания, заболевания нервной, дыхательной  или эндокринной системы;

- беременность или лактация;

- отклонения от лабораторных норм в клинических и биохимических анализах более чем 1 степени;

В качестве инертного биосовместимого геля использовали 2%  полиакриламидный гель ( ПААГ) на PBS без токсических компонентов полимеризации.

Препарат клеток меланомы мыши В-16 ( ПКММ В-16) представляет собой стерильно приготовленную взвесь живых  опухолевых клеток меланомы В-16 мыши в концентрации 100 млн. клеток в 1 мл среды. Общий объем препарата для одного введения – 0,5 – 1,0 мл.

Методика вакцинации.

Гель в объеме 2,5- 5 мл вводили под кожу ( лопаточная область , наружная поверхность плеча/голени, передняя поверхность брюшной стенки) в сроки от 1 до 4 мес. после хирургического лечения. Введение осуществляли медленно, в течение 1 мин.( рис. 3)


 

Рис.3.  Тень гелевой капсулы через 1 месяц после подкожной иньекции в свете ультразвукового исследования ( стрелки указывают размер объема геля).

 

На 21-40-й день после подкожной инъекции геля за соединительнотканную капсулу, образовавшуюся вокруг введенного инертного геля, внутрь капсулы вводили 2 мл ( 100 млн. клеток) ПКММ В-16 по обычной методике для внутримышечной инъекции.  За указанный период наблюдения больные не получали никакого адьювантного  лечения (химиотерапии, лучевой терапии, биотерапии или каких ибо других исследуемых препаратов).

Каждые последующие 3 месяца всем пациентам в процессе динамического наблюдения проводили ультразвуковое обследование, клинический, биохимический анализы крови, определяли уровень маркера S- 100 А1В, цитотоксическую активность лимфоцитов. Каждые 6 месяцев проводили рентгенографию или компьютерное обследование. Сроки наблюдения составили от 12 до 64 месяцев (в среднем  49.7 месяцев).

Перейти в оглавление статьи >>>

 

Результаты исследования и их обсуждение

После подкожного введения геля больным ни в одном случае  не наблюдали каких-либо побочных эффектов. У всех больных были отмечены слабовыраженные аллергические реакции  на введение препарата ПКММ В-16 в виде гиперемии и зуда кожи в области введения препарата с умеренной болезненностью мягких тканей. Аллергическая реакция типа  кожных высыпаний  папулезного характера с зудом отмечена у 30 больных (85,7%). Кожные проявления исчезали самостоятельно в течение 7 суток без использования антигистаминных препаратов.

У 29 больных в течение первых суток после введения вакцины имело место однократное кратковременное  повышение температуры тела до 38 оС.

      При исследовании гематологических показателей крови изменений не отмечено. Реакции со стороны  лимфатических узлов

(увеличение, припухлость или болезненность) также не наблюдали. Описанные выше реакции на вакцину не влияли на привычный образ жизни.

Эффективность лечения оценивали по следующим критериям:

- отсутствие признаков прогрессирования опухолевого роста по результатам обследования;

- отсутствие повышения уровня маркера S-100 А1В;

- анализ крови на иммунный статус ( ЦТАФ, ИЛ4).

Физикальные, инструментальные  и лабораторные исследования  свидетельствовали о нетоксичности метода вакцинотерапии, последняя  хорошо переносилась больными и сопровождалась иммунологическим ответом у всех 35 больных,  что подтверждено показателями периферической крови.

Показателем эффективности иммунотерапевтического воздействия на организм является образование особого пула имуннокомпетентных клеток, относящихся к цитотоксическим Т-лимфоцитам (фенотип CD3+CD8+). Данный фенотип клеток появляется в сыворотке пациента только при воздействии специфического антигена. Повышение уровня  CD8+ Т-лимфоцитов после введения вакцины  свидетельствует о формировании специфического противоопухолевого иммунитета.  В 30 случаях получена стимуляция специфического иммунного ответа, показателем которого является повышение уровня  CD3+CD8+ Т-лимфоцитов (см. таблицу 1). У 5 пациентов    уровень   CD3+CD8+ Т-лимфоцитов практически не изменился, что свидетельствует о крайне слабом иммунном ответе.

 

Таблица 1.   Оценка иммунного статуса  после вакцинации

 

Фенотип клеточных

элементов

 

Через 3 дня

 

Через 10 дней

 

Через 1 мес.

 

Норма

Количество клеток

абс

109

%

абс

109

%

абс

109

%

абс

109

%

Лимфоциты

2.1

27

1.9

20

1.9

22

1.2-3.2

19-37

СD 3+

1.74

82.70

1.50

78.85

1.55

81.42

0.59-2.72

49-85

 

CD3+CD4+

0.86

49.31

0.70

46.94

0.75

48.34

0.31-1.95

26-61

 

CD3+CD8+

0.54

30.87

0.64

42.80

0.79

51.53

0.12- 0.99

10-31

 

 

CD19+

0.27

12.82

0.15

8.09

0.13

6.66

0.05-0.54

4-17

 

CD16+CD56+

0.24

11.49

0.14

7.22

0.07

3.52

0.06-0.9

5-28

 

CD3+CD16+CD56+

0.19

8.89

0.06

3.01

0.12

6.38

0-0.035

0-12

HLADR

0.15

6.95

0.11

5.80

0.04

2.32

0-0.35

0-12

CD3+HLA-DR+

0.08

4.03

0.03

1.73

0.07

3.44

0-0.77

0-24

 

Лихорадка I и  II степени, отмеченная  у 29 больных, сопровождалась кратковременным недомоганием и в течение первых суток самостоятельно без терапевтического вмешательства купировалась.  Локальные кожные реакции после  введения  вакцин проявлялись гиперемией и локальным отеком  в месте введения, стихали  в течение  нескольких дней  после вакцинации  и  также не требовали дополнительного лечения (рис. 4).

 

Рис. 4. Кожная реакция после введения ксеновакцины на примере больной Г.

а- через 24 часа после введения клеток меланомы В-16 в гелевую капсулу.

б-   через 48 часа после введения клеток меланомы В-16 в гелевую капсулу.

в- через неделю после введения клеток меланомы В-16 в гелевую капсулу.

г- через 2 месяца после введения клеток меланомы В-16 в гелевую капсулу.

 

 

Следует отметить, что подобные симптомы, как правило,  традиционно наблюдаются при вакцинации. При повторных вакцинациях возможны побочные эффекты в течение 4-5 суток в виде лихорадки,  озноба, ощущения жара, кожной сыпи,   увеличения некоторых групп лимфатических узлов. Это объясняется выработкой специфических антител после ревакцинации. Подобных изменений мы ни в одном случае не наблюдали.

За весь период клинического наблюдения за  больными прогрессирование заболевания зарегистрировано  в 8 (22,9%) случаях (появились гематогенные метастазы в  печень), из них у 5 (14,3%) пациентов спустя 14-18 месяцев после энуклиации и начала ксеновакцинации и у 3 (8,6%) больных - спустя 48,49 и 52 месяца.

В остальных 27 (77,15%) случаях больные по настоящее время находятся в процессе динамического наблюдения (медиана наблюдения 49,7 мес.) с мониторингом основных жизненных параметров, сохраняют активность, работоспособность и ведут обычный образ жизни.

Перейти в оглавление статьи >>>

 

Заключение

Результаты предварительных клинических исследований показали безопасность и эффективность метода использования живой ксеногенной вакцины в профилактике метастазов увеальной меланомы после хирургического этапа лечения. Безрецидивная выживаемость в группе ксеновакцинации и группе контроля составила 77,1% и 43,6%, соответственно, при медиане наблюдения 49,7 месяцев.

Ксеновакцинация сопровождается иммунологическим ответом, что подтверждено показателями периферической крови. При этом клинические и лабораторные исследования свидетельствуют о хорошей переносимости больными метода.    

Общеизвестно, что результаты, получаемые в клинических исследованиях, всегда лучше чем общепопуляционные. Полученные нами результаты также существенно превосходят  статистические данные, что в определенной степени может быть обусловлено строгими соблюдениями критериев включения/исключения. Тем не менее, первый опыт ксеновакцинации больных увеальной меланомой дает основание рассматривать его как доступный метод профилактики метастазов увеальной меланомы.

Перейти в оглавление статьи >>>

 

Список литературы:

  1. Абрамов В.Г. Выживаемость больных после энуклиации по поводу меланомы хориоидеи  // Опухоли и опухолеподобные заболевания органов зрения.- М.,1990.-С.5-7.
  2. Бровкина А.Ф., Вальский В.В. и др. Риск метастазирования меланом хориоидеи после брахитерапии  // Вестн. офтальмол.- 2003.- №2.-С.26-28.
  3. Бровкина А.Ф.  Органосохранное  лечение внутриглазных опухолей (тенденции развития)  // Вестн. офтальмол.- 2004.-№1.-С.22- 25.
  4. Бровкина А.Ф., Кешелава В.В., Баласанян В.О. Отдаленные результаты сочетанной лучевой терапии увеальных меланом // Клин. Офтальмол.- 2004.- Т.5, №1.- С. 32-34.
  5. Бровкина А.Ф., БаласанянВ.О., Кешелава В.В. Роль радионуклеида 59 Fe в потенцировании эффективности брахитерапии // Тезисы науч.-практич. конференции с международным участием « Современные возможности диагностики и лечения витрео-ретинальной патологии». -М.,2004.- С. 82-85.
  6. Давыдов М.И., Аксель Е.М. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2005г.// Вестн. Рос. онкол. науч. центра им. Н.Н. Блохина РАМН.- 2007.-Т.18, №2,прил 1.- С. 12-13. 
  7. Москалева Е.Ю., Родина А.В., Гукасова Н.В. и др. Индукция меланомоспецифического ответа у мышей после ксеногенной вакцинации клетками меланомы человека, введение в предварительно имплантированный под кожу полиакриламидный гель // Иммунохимия- 2000.-Т.6, №3-5.- С.329-336.
  8. Чиссов В.И., Сергеева Н.С., Северин С.Е. и др. Разработка метода противоопухолевой вакцинации мышей в предварительно инкапсулированный полиакриламидный гель на модели мышиной меланомы В-16 // Молекул. мед.- 2004.- №2.- С.24-28.
  9. Hirabayashi Y., Hamaoka A., Matsumoto M.  et al.  Syngeneic monoclonal antibody against melanoma antigen with interspecies cross-reactivity recognized Gm 3 , a prominent ganglioside of  B-16 melanoma // J. Biol. Chem.-1985.- Vol. 260.- Р.13328-13333.
  10.  Isaacs A., Lindenmann J. et al. Virus interference, I, // The interferon // Proc.Roy. Soc. Lond. Ser. B.- 1975. –Vol. 147. –P.258-267.
  11. Kirkwood J.M. Systemic adjuvant treatment of  high-risk melanoma: the role of  interferon alfa-2b and other immunotherapies,  // Eur. J.  Cancer. -1998. –Vol. 34. –P. 12-17.
  12. Peter I.,  Mezzacasa A.,  LeDonne P. et al. Comparative analysis of  immunocritical melanoma markers in the mouse melanoma cell lines B-16, K1735 and  S91-M3, // Melanoma Res.- 2001.- Vol. 11,  №1.-P. 21-30.
  13. Rollings S.A., Birks C.W., Setter E. et al. Retroviral vector producer cell killing in human serum is mediated by natural antibodies and complement: strategies for evading the humoral immune response // Hum. Gen Ther.- 1996.Vol.52.-№ 7.- P.619-626 .  
  14.  Seregard S. Long-term survival after ruthenium plaque radiotherapy for uveal melanoma. A meta-analysis of studies including 1066 patients // Acta Ophthalmol. Scand.- 1999.- Vol.77.- P.414-417.
  15. Vollmers H., Birchmeier W. Monoclonal antibodies that prevent adhesion of B-16 melanoma cells and reduce metastasis in mice : cross-reaction with human tumor cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1983.- Vol. 80.-P. 6863-6867.
  16.  Zimmerman L., McLean J., Fester W. Does enucleation of the eye containing a malignant melanoma prevent or accelerate the dissemination of tumor cell? // Br.J. Ophthalmol.- 1978.- Vol.62,-№6.- P.420-425.  
  17.  Zybin D.V., Kotelevits A.G., Sologub V.K.et al.  Patent № 6.972.194 Use of  polyacrialamide gel for forming of connective tissue capsule in a mammal for cultivation of xenogenic and allogenic cells. 06.2006. USA,Washington

 

Перейти в оглавление статьи >>>

 

ISSN 1999-7264

© Вестник РНЦРР Минздрава России

©  Российский научный центр рентгенорадиологии Минздрава России